Methoden
Klonierung in E. coli
- Plasmid-Isolation: Plasmid Mini-Prep
- Plasmid-Isolation: Plasmid Midi-Prep
- Monitoring: Agarosegelelektrophorese
- DNA schneiden: Analytischer / präparativer Restriktionsverdau
- Schnittprodukte isolieren: Gelextraktion
- Monitoring: Konzentrationsbestimmung von DNA
- Schnittprodukte neu zusammenfügen: Ligation
- Empfänger auf die DNA-Aufnahme vorbereiten: Herstellung kompetenter E. coli-Zellen
- Generierte DNA in die Zelle bringen: Transformation von E. coli mittels Hitzeschock
- Suche nach den transformierten Bakterien: Colony-PCR-Screen
Die richtige DNA basteln mit PCR
- Grundreaktion: Präparative PCR (Polymerasekettenreaktion)
- SOE-PCR (splicing by overlapping extension PCR)
- PCR-Produkt-Aufreinigung
- Einfache DNA-Aufreinigung: Ethanolfällung
Protein-Analytik
- Proteine isolieren: Gesamtzellextrakt aus S. pombe (TCA-Prep)
- Proteingemisch auftrennen: SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE)
- Zielprotein nachweisen: Western Blot
Transformation von S. pombe
- Isolation chromosomaler DNA aus S. pombe
- Generierte DNA in die Zelle bringen: Transformation von S. pombe