Monitoring: Konzentrationsbestimmung von DNA

Die Konzentration von DNA wurde anhand der Absorption bei 260 nm im UV-Spektrometer bestimmt. Hierzu wurde eine 1:200-Verdünnung der Plasmidlösung hergestellt und diese in einer Quarzküvette gegen TE-Puffer (pH 7,5) vermessen. Zur Beurteilung der Reinheit der Plasmidlösung wurde der Quotient aus der Absorption bei 260 nm und der Absorption bei 280 nm herangezogen, wobei ein Wert zwischen 1,8 und 2,0 für eine hohe Reinheit sprach. Die Konzentration der DNA wurde aus der gemessenen Absorption nach dem Lambert Beer Gesetz bestimmt, nach welchem eine Absorption von 1 einer DNA-Konzentration von 50 mg/ml entspricht:

A = c * d * ε

A: Absorption, c: DNA-Konzentration, d: Schichtdicke (1 cm), ε: Extinktionskoeffizient doppelsträngiger DNA bei 260 nm